04 // Compêndio Interativo de Fórmulas // FÍSICO-QUÍMICA, LEIS DOS GASES, CINÉTICA E ELETROQUÍMICAA = ε · l · c = −log₁₀(I / I₀)

Lei de Beer-Lambert para Absorbância Óptica e Espectrofotometria

Equação de química analítica que relaciona linearmente a absorbância de luz A à absortividade molar ε, caminho óptico l e concentração molar c.

Referência da fórmula

Fórmula principal

A = ε · l · c = −log₁₀(I / I₀)

Formas isoladas

T = I / I₀ = 10^(−A)

c = A / (ε · l)

Variáveis e unidades

Variáveis e unidades — Beer-Lambert Optical Absorbance Law
Symbol	Name	Unit
A	Optical Absorbance A	AU
eps	Molar Absorptivity ε	L/(mol·cm)
l	Cuvette Path Length l	cm
c	Molar Concentration c	mol/L

Entradas e parâmetros

epsMolar Absorptivity ε[L/(mol·cm)]

lCuvette Path Length l[cm]

cMolar Concentration c[mol/L]

Resultado calculado (Optical Absorbance A)

A =0.622AU

Notas e explicação da fórmula

Differential attenuation dI = −σ N I dx integrated across thickness l yields I = I₀ e^(−σNl), converted to base-10 absorbance A = εlc.
Spectrophotometers are most accurate for A between 0.1 and 1.5 AU (transmittance 79% down to 3.2%).

Exemplos resolvidos

#1: NADH solution at c = 1.0 × 10⁻⁴ M (100 μM) measured at 340 nm (ε = 6,220 M⁻¹cm⁻¹) in a standard 1.0 cm quartz cuvette.

ε = 6,220 L/(mol·cm)l = 1.0 cmc = 1.0×10⁻⁴ M

A = 6,220 × 1.0 × 0.0001

→ A = 0.622 AU (Transmittance T = 10^(−0.622) = 23.9%)

#2: DNA concentration check at 260 nm where A = 1.00 corresponds to 50 μg/mL dsDNA in a 1 cm path.

Measured A₂₆₀ = 0.48 AUl = 1.0 cm

Concentration = 0.48 × 50 μg/mL

→ 24.0 μg/mL dsDNA

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Perguntas Frequentes (FAQ)

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